1、应用范围

DENV Detect IgM-ELISA检测试剂是一种用来定性检测人是否感染登 革热病毒的ELISA检测系统，它可以检测出人血清中是否存在抗登 革热病毒源性重组抗原（DENVRA I-IV）的IgM抗体。此诊断实验可辅助诊断人是否感染了登 革热病毒。此试剂盒不能用于筛查血液或血液成分，仅供体外诊断用。

2、前言说明

登 革热是一种急性 病 毒性疾病，它主要通过埃及伊蚊传播。登 革热在临 床上主要表现为：双相热、皮疹和造血抑制，还可表现出全身症 状，如浑身不舒服、关节 痛、肌 肉疼 痛和头 痛，有时还可能出现极为罕见的出血性高烧，并可能导致致命性的休克。登 革热主要流行于热带和亚热带地区，大概每年会发生100,000,000例。据统计，每年大概会出现500到1000万例登 革热病 人，同时还会出现250000到500000例登 革热出血 热。在2002年，据报道，30多个拉丁美洲的国家出现10000000例登 革热病 人，并且大多数是登 革热出血 热（DHF）病 人。之后在2003年到2005年，在印度的一些地方也广泛流行DHF。在美国，据报道，DHF病 人在1996到2002年就增加了三倍。据报道说，登 革热也在夏威夷和德克萨斯州的拉雷多爆发过。由于病毒的潜在传 染性，一些病毒包括登 革热都被列为CDD的A类潜在传染原。Inbios公司的登 革热IgM抗体捕获法ELISA试剂盒适很适合于CDC中使用，在感染后3到5内内，原发性和续发性 病 人的体内都有可检测到的IgM抗体水平，而且这种抗体通常可以在人体内持续90天。

3、实验原理

DENV Detect IgM ELISA试剂盒是由一种酶联扩大的两步法免疫检测系统。在此实验中，将登 革热检测阴性质控（代表不反应的血清）、阳性质控和未知抗体浓度的血清样品加入到包被了抗人IgM抗体的微孔中温育，之后分别加入登 革热源性重组抗原DENVRA（I-IV）和正常细胞抗原（NCA）进行温育。登 革热IgM试剂盒的血清样品必须用样品稀释液进行稀释。温育并洗板后，用HRP标记的DENVRA（I-IV）特异性抗体处理。第 二次温育并洗板后，加入TMB底物液进行温育。之后再加入酸性终止液，450nm处测OD值可确定底物反应的程度。当高于一定数值时（临界值），样品的吸光度值可确定样品中是否存在登 革热抗体。

注意：阴性质控和弱阳性质控以内在质控形式提供，其目的是为了监测试剂盒成分的完整性。

4、试剂盒成分

登 革热IgM ELISA试剂盒提供了足够做96人份所需要的试剂。试剂盒成分如下：

登 革热检测特定材料：

1） 抗人IgM包被的包被板：带板盖的板架，抗人IgM包被的96孔包被板。2-8℃下储存，有效期内稳定。抗人IgM包被的微孔可捕获人样品中的IgM抗体。

2） 样品稀释液：1瓶，25ml，含吐温20的Tris-HCl缓冲液，0.05%的Proclin-300防腐剂。用于试验样本，阴性质控和阳性指控的稀释，2-8℃下储存，有效期内稳定。

3） 即用型的登 革热重组抗原：1瓶，3ml，含吐温20的Tris-HCl缓冲液，0.05%的Proclin-300防腐剂，2-8℃下储存，有效期内稳定。

4） 即用型正常细胞抗原（NCA）：1支，3ml，含吐温20的Tris-HCl缓冲液，0.05%的Proclin-300防腐剂，COS-1细胞上清。，2-8℃下储存，有效期内稳定。

5） 登 革热检测阴性质控：1支，50ul的阴性血清，登 革热检测阴性质控可辅助监测试剂盒的完整性。2-8℃下储存，有效期内稳定

6） 登 革热检测阳性质控：1支，50ul的阳性血清，登 革热检测弱阳性质控可辅助监测试剂盒的完整性。2-8℃下储存，有效期内稳定

7） 10倍浓缩洗涤液：1瓶，120ml，含吐温20的磷酸缓冲盐，2-8℃下储存，有效期内稳定。

8） HRP标记的即用型酶联物，1瓶，6ml，HRP标记的黄热病毒活性单克隆抗体，含吐温20的Tris-citrate缓冲液，＜0.01%的硫柳汞防腐剂和添加剂，2-8℃下储存，有效期内稳定。

9） Enwash：1瓶，20mlEnwash溶液，含吐温20的磷酸缓冲盐，2-8℃下储存，有效期内稳定。

10） TMB底物液：1瓶，9ml，2-8℃下储存，有效期内稳定。注意：底物液必须始终储存于避光试剂瓶中。

11） 终止液：1瓶，内含6ml即用型的终止液，2-8℃下储存，有效期内稳定。

注意：强酸，请戴保护手套、口罩和安全镜，按照安全条理处理所有的材料。

5、实验所需器材但试剂盒不提供

1） 可在450nm处读数的酶标仪

2） 生物学或高纯度水

3） 真空泵

4） 洗板机

5） 1-10ul的单道移液器，50-200ul的单道和多道移液器。

6） 聚丙烯试管

7） Parafilm封口膜

8） 计时器

9） 旋涡混合器

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