儿茶酚胺（三联检）

产品名称

通用名称：肾上腺素/去甲肾上腺素/多巴胺联合检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：CAT ELISA

产品规格：3×96T

产品别名：儿茶酚胺是一类芳香胺的总称（去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺以及他们的衍生物）也叫三联检！

预期用途

儿茶酚胺试剂盒可用于尿液、血浆中肾上腺素/去甲肾上腺素/多巴胺的体外定量检测。

前言简介

儿茶酚胺是一类芳香胺的总称（去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺以及他们的衍生物），它们分别是一些激素以及神经递质。肾上腺素以及去甲肾上腺素是由多巴胺构成的。它们作用于心肌、（肾上腺素）以及外周循环（去甲肾上腺素），并且帮助身体处理急慢性的压力。

儿茶酚胺的含量增加可以在嗜铬系统中出现（嗜铬细胞瘤、成神经细胞瘤、神经节瘤）。其含量的上升以及下降也会出现在、退行性、以及中。多巴胺及其衍生物的检测一般特异性的用于怀疑患有成神经细胞瘤的儿童。

检测原理

去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺使用环已二烯二醇特异性亲和凝胶进行提取，然后酰化成N-酰基去甲肾上腺素、N-酰基肾上腺素、N-酰基多巴胺，然后酶促转化为N-酰基去甲变肾上腺素、N-酰基变肾上腺素、N-酰基-3-甲氧酪胺。

儿茶酚胺试剂盒采用竞争法原理。3块微孔板上分别包被了肾上腺素、去甲肾上腺素以及多巴胺。样本中酰化的儿茶酚胺与微孔板上包被的儿茶酚胺竞争性的同抗血清中固定数量的结合位点相结合。当系统达到平衡态后，通过洗板除去游离的抗原以及游离的抗原—抗血清复合物。结合到酶标板上的抗体可以用HRP标记的抗兔IgG检测到。然后HRP与底物TMB反应，反应可以通过酶标仪在450nm下进行检测。所检测到的抗体与样本中的儿茶酚胺浓度成反比。

儿茶酚胺试剂盒组成成分

提取板：2×48T，包被有硼酸盐亲和凝胶

提取缓冲液：6ml，即用型

盐酸：21ml，即用型 含0.025M盐酸

酰化试剂：6ml，即用型 含二甲亚砜以及DMF

酰化缓冲液：20ml，即用型

标准品（1-7）：7×4ml，即用型 浓度见下表

检测尿液时，不需要使用标准品2；检测血浆时，不需要使用标准品7

质控品1+2：2×4ml，即用型 具体浓度见质控单

酶试剂：3×1.7ml，冻干粉 含儿茶酚胺甲基转移酶

辅酶试剂：1ml，即用型 含S-腺苷甲硫氨酸

酶缓冲液：3.5ml，即用型

抗血清来源：兔

肾上腺素抗血清        2.5ml 即用型 蓝色

去甲肾上腺素抗血清    11ml  即用型 黄色

多巴胺抗血清          5.5ml 即用型 绿色

微孔板：3×96T

肾上腺素蓝色色码

去甲肾上腺素   黄色色码

多巴胺   绿色色码

酶联物：12ml，即用型 含HRP标记的抗兔IgG

洗涤缓冲液：3×20ml，浓缩型 使用前用蒸馏水稀释至500ml最终体积

底物液：3×12ml，即用型

终止液：3×12ml，即用型 含0.3M硫酸

贴膜：10片

检测步骤

肾上腺素

1.每孔加入20ul新鲜配制好的酶混合物（蓝色色码）

2.移取100ul标准品、质控品、样品提取液到相应的孔中

3.使用贴膜封板，在室温下，使用水平旋转振荡器（400~600r/min）温育30分钟

4.每孔加入20ul抗血清

5.封板，摇匀10秒，然后2~8℃下，温育12~20小时（过夜反应）。

6.弃去孔内液体，使用250ul洗涤液洗板4次

7.每孔加入100ul酶联物

8.在室温下，使用水平旋转振荡器（400~600r/min）温育30分钟

9.重复步骤6

10.每孔加入100ul底物液

11.在室温下，使用水平旋转振荡器（400~600r/min）温育25~35分钟

12.每孔加入100ul终止液

13.15分钟内，使用酶标仪在450nm波长下检测吸光值

去甲肾上腺素

1.每孔加入20ul新鲜配制好的酶混合物（黄色色码）

2.移取15ul标准品、质控品、样品提取液到相应的孔中

3.使用贴膜封板，在室温下，使用水平旋转振荡器（400~600r/min）温育30分钟

4.每孔加入100ul抗血清

5.封板，摇匀10秒，然后2~8℃下，温育12~20小时（过夜反应）。

6.弃去孔内液体，使用250ul洗涤液洗板4次

7.每孔加入100ul酶联物

8.在室温下，使用水平旋转振荡器（400~600r/min）温育30分钟

9.重复步骤6

10.每孔加入100ul底物液

11.在室温下，使用水平旋转振荡器（400~600r/min）温育25~35分钟

12.每孔加入100ul终止液

13.15分钟内，使用酶标仪在450nm波长下检测吸光值

多巴胺

1.每孔加入10ul新鲜配制好的酶混合物（绿色色码）

2.移取50ul标准品、质控品、样品提取液到相应的孔中

3.使用贴膜封板，在室温下，使用水平旋转振荡器（400~600r/min）温育30分钟

4.每孔加入50ul抗血清

5.封板，摇匀10秒，然后2~8℃下，温育12~20小时（过夜反应）。

6.弃去孔内液体，使用250ul洗涤液洗板4次

7.每孔加入100ul酶联物

8.在室温下，使用水平旋转振荡器（400~600r/min）温育30分钟

9.重复步骤6

10.每孔加入100ul底物液

11.在室温下，使用水平旋转振荡器（400~600r/min）温育25~35分钟

12.每孔加入100ul终止液

13.15分钟内，使用酶标仪在450nm波长下检测吸光值

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