乙酰胆碱受体抗体测定试剂盒（ELISA法）

通用名称：乙酰胆碱受体抗体测定试剂盒（ELISA法）

英文名称：Medizym® anti-AChR

产品规格：96T

预期用途

用于定量测定人血清中乙酰胆碱受体抗体（AChR Ab）浓度。乙酰胆碱受体（AChR）的自身抗体是神经肌肉接头衰竭的原因，这是一种神经肌肉疾病，导致肌肉无力和。 这些抗体的测量在疾病诊断和管理中具有相当大的价值。

检测原理

测定系统取决于人血清中AChR Ab与AChR上类似位点结合的能力，如各种单克隆抗体，如MAb1（包被在ELISA板孔上）和/或MAb2和/或MAb3（用生物素标记）。 在不存在AChR Abs的情况下，在板孔上包被的MAb1，AChR和MAb2与MAb3生物素之间形成复合物。然后通过添加链霉抗生物素蛋白过氧化物酶（SA-POD），底物（TMB）和终止溶液来检测结合的MAb2和MAb3生物素。

在AChR Abs存在下，MAb1-AChR-MAb2 / MAb3生物素复合物的形成受到抑制，导致结合的SA-POD较少，450nm处的最终吸光度降低。 测试血清中AChR Abs浓度越高，MAb生物素结合的抑制越大。

试剂盒组成成分

微孔板：12 X 8包被有ACHR的单克隆抗体

浓缩缓冲液：100ml，可稀释为1000ml

链霉亲和素过氧化物酶（SA-POD）：1x 0.7ml，浓缩型可稀释为14.0ml

底物液TMB：1×15ml，即用型

终止液：1×10ml，即用型

SA-POD稀释液：15ml，即用型

MAb-生物素：3瓶冻干粉，AChR单克隆抗体（MAb2，MAb3），生物素化; 

MAb-生物素稀释液：15ml，即用型

AChRF：3×0.7ml冻干粉胎儿类型AChR

AChRA：3×0.5ml冻干粉，成人类型ACHR

AChR稀释液：5ml，即用型

C1阴性质控：3ml即用型

CII-CIII阳性质控：2×0.7ml，即用型浓度见质控单  

1-4标准品：4×0.7ml，即用型浓度见质控单

所需材料（未提供）

精密移液器10 - 100μl

- 多通道移液器

-一次性移液器吸头

-Eppendorf管（1.5 ml）

-洗板机

- 微板振动筛（> 500 / min），不是轨道振动筛

- 具有450 nm和620或690 nm的微板读板器

- 蒸馏水或去离子水

- 吸水纸或纸巾

-封板膜

检测步骤

1.将100μl阴性对照（CI），校准物（1-4），阳性对照（CII，CIII）和测试血清移入单独的1.5ml Eppendorf管中，并做好相应标记。

2.将25μl胎儿和成人型AChR混合物（K + L）移入每个Eppendorf管（来自步骤1）并密封管。确保所有液体都在每个管的底部（如果有疑问，将离心管在微量离心机中以10-15,000g离心10秒钟）。轻轻涡旋并在2-8℃下孵育过夜（16-20小时）。

3.使用涡旋混合器轻轻混合来自步骤2的每个样品-AChR混合物管。根据测定方案，将50μl每种样品-AChR混合物移液到相应的孔（A）中，复孔测定。

4.盖上平板并在室温（18-25℃）下孵育60分钟，同时以> 500rpm振摇。

5.通过使用洗板机，或通过在合适的容器上快速翻转板孔框架来弃去板内溶液。用300μl洗涤溶液（稀释的B溶液）洗涤孔3次。在干净的吸水纸上轻轻敲打倒置的板孔以去除多余的洗涤液。

6.向每个孔中加入50μl重构的MAb-生物素溶液（由H和J制备）。

7.盖上平板并在室温（18-25℃）下孵育60分钟，同时以> 500rpm振摇。

8.通过使用洗板机，或通过在合适的容器上快速翻转板孔框架来弃去板内溶液。用300μl洗涤溶液（稀释的B溶液）洗涤孔3次。在干净的吸水纸上轻轻敲打倒置的板孔以去除多余的洗涤液。

9.向每个孔中加入100μl重构的SA-POD（由D和G制备）。

10.盖上平板并在室温（18-25℃）下孵育30分钟，同时以> 500rpm振摇。

11.通过使用洗板机，或通过在合适的容器上快速翻转板孔框架来弃去板内溶液。用300μl洗涤溶液（稀释的B溶液）洗涤孔3次。手工洗板情况下，额外多一个洗涤步骤，即在*一次洗板时，用纯净水洗板一出去任何的泡沫。在干净的吸水纸上轻轻敲打倒置的板孔以去除多余的洗涤液。

12.向每个孔中加入100μl底物溶液（E）并立即摇动。

13.在室温下黑暗中孵育30分钟。

14.向每个孔中加入50μl终止溶液（F）。摇动板5秒钟。

15.在添加终止溶液后30分钟内读取450nm处的光密度，以620或690nm作为参考波长。

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