乙 脑IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

通用名称：乙 脑IgM抗体检测试剂盒

英文名称：JE IgM Antibody Detection Kit

产品规格：96T

预期用途

检测日本乙 脑病毒（JEV）的JE（日本乙 脑）IgM检测试剂盒是一用于人血清中抗重组抗原（来源于JEV）的抗体的检测。这一检测有助于人是否感染了JEV的诊断。此试剂盒并不用于血液或血液成分的筛查，仅供科研使用。

实验原理

JE IgM酶联免疫吸附试剂盒是一酶促放大的“两步”法夹心酶免 检测试剂。在测试中，JE IgM高质控（代表有免疫活性的血清）、JE低性质控（代表着无免疫活性的血清）与未知的样本血清在微孔板上孵育。血清样品用IgM的样品稀释液进行稀释，然后与包被有抗人IgM抗体的包被板一起孵育，紧接着一部分与乙 脑重组抗原，一部分与与正常细胞抗原孵育，洗板，加HRP标记的酶联物，三次孵育，洗涤后，加底物液，然后加终止液，酶标仪上检测。当吸 光度高于一定值时，JERA和质控品的吸光率可准确地测定JEV抗体是否存在。

乙 脑IgM抗体检测试剂盒组成

◆包被板：96孔包被了抗人IgM的微孔可用来捕获人样品中的IgM抗体。

◆样品稀释液, 25ml ，1瓶，用来分析前稀释样本。

◆重组抗原（JERA），1支，3ml即用型的JERA。

◆正常细胞抗原（NCA）：1支，3ml即用型的NCA，即用。

◆阴性质控：1瓶，50μl，可用来辅助监测试剂的完整性。

◆阳性质控：1瓶50μl，可用来辅助监测试剂的完整性。

◆10倍浓缩洗涤液：1瓶, 120ml，内含洗涤步骤中将使用到的洗涤缓冲液。

◆HRP酶联物：1瓶, 6ml，内含预稀释好的HRP黄热病毒活性单克隆抗体。

◆Enwash：1瓶，20ml，Enwash在加酶联物后的洗板程序之间使用。

◆底物液：1瓶，9ml，即用型。

◆终止液：1瓶6ml，用来终止酶反应。

实验步骤

1. 阳性质控，阴性质控和未知样本应在乙 脑重组抗原和正常细胞抗原试验中做双孔检测。未知样本可以做单孔或双孔检测，但乙 脑重组抗原和正常细胞抗原试验中都必须检测，一个96孔板最多可检测44个样本，具体可参考本节末尾的流程图。

2. 标记好试验所需包被板。

3. 用所提供的样品稀释液将待测血清和质控稀释至1/100，用小聚苯乙烯软管完成稀释。至少使用4ul的血清样品，阴性、阳性质控。例如4μl的血清加入396μl的样品稀释液配制出1/100的稀释液。

4. 用多头或单头的移液管将稀释的样品，低值质控，高值质控各50ul加入相应的微孔中。

5.用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所有板条的底部是不需要覆盖的。

6.在带有水的潮湿的培养箱中，37℃下保湿温育板条1小时。加湿可以使用孵化器底部的水盘来实现。

7.孵育后，使用自动洗板机用1X 的洗涤缓冲液洗板6次，每孔300ul。

8.用多头的移液器在A-D列加入50ul的乙 脑重组抗原，E-H列加入50ul的正常细胞抗原；

9.用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所以板条的底部是没有覆盖的。

10. 在孵育器中37℃下温育板条1小时。

11. 在温育后，用自动洗板机洗板6次，每次洗板时每孔使用300μl的洗涤液。

12. 用多头的移液器每孔加入50μl的HRP标记的酶联物。

13. 用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所以板条的底部是没有覆盖。

14. 在37℃下避光温育板条1小时。

15. 温育后，使用洗板液，用自动洗板机洗板6次。

16. 用头多的移液器在每孔中加入150μl的Enwash。

17. 不用封板，在室温下温育5分钟。

18. 在温育后，使用1X的洗板液，用自动洗板机洗板6次。

19. 用多头的移液管每孔加入75μl的液态TMB底物液。

20. 不用封板，将微孔板在室温下避光静置10分钟。

21. 用多头的移液管在每孔中加入50μl的终止液，不用封板，在室温下孵育1min。

22. 用酶标仪在450nm处读取OD值， 请确保酶标仪不会减去或标准化任何空白值或孔。

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