乙 脑IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

通用名称：乙 脑IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Japanese Encephalitis IgG ELISA

产品规格：96T

预期用途

乙 脑IgG抗体检测试剂盒在人血清中检测JEV（日本乙 脑病毒）衍生的重组抗原（JERA）（1-4）的抗体IgG。该试剂盒有助于诊断人是否感染了JEV。此试剂盒并不用于血液或血液成分的筛查，该试剂盒目前并没有用于疫苗优化中的血清型研究。

实验原理

JE IgG酶联免疫吸附试剂盒是酶促放大的“两步”法夹心酶免 检测试剂。在实验中，JE IgG阳性质控（代表着活性或者可疑活性的血清）、JE阴性质控（代表着非活性的血清）与未知的样本血清在微孔板上孵育。血清样品用IgG样品稀释缓冲液进行稀释。经温育和洗涤，包被孔加入辣根过氧化物酶标记的抗人特异性IgG。经二次的温育和洗涤步骤，然后加入TMB底物液温育。加终止液，酶标仪上检测。当高于一定值时，JERA和质控品的吸光值比可准确地测定JEV抗体是否存在。

乙 脑IgG抗体检测试剂盒组成

◆包被板：96孔板即用型。

◆样品稀释缓冲液：两瓶，25ml ，用于血清样本稀释

◆日本脑 炎病毒（JE） IgG 阳性质控：一瓶，50μL。该阳性质控也可以用来监控试剂盒的完整性。

◆JE阴性质控：一瓶，50μL。该阴性质控可以用来监控试剂盒的完整性。

◆酶联物：一瓶，6ml，预稀释的HRP标记的羊抗人IgG，在下面的过程使用。

◆10倍浓缩洗涤液：1瓶, 120ml，内含洗涤步骤中将使用到的洗涤缓冲液

◆Enwash：1瓶，20ml，Enwash在加酶联物后和在洗板前使用

◆底物液：1瓶，9ml

◆终止液：1瓶6ml，用来终止酶反应

实验步骤

1.标记好试验所需包被板。

2.用所提供的稀释液将实验血清、JE阴性质控和JE IgG弱阳性质控按1/300稀释。

3.使用多通道移液器将1/300稀释的样本血清、JE阴性质控和 JE IgG弱阳性质控，按50μL/孔分别加至相应的孔中。

4.用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所有板条的底部是没有覆盖的。

5.在温箱中37℃下温育板条1小时。

6.经孵育后，使用1X 的洗涤缓冲液在洗板机上洗板6次，每孔300ul。

7.每孔用多通道移液器按50μl/孔加入即用型的酶联物。

8.用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所以板条的底部是没有覆盖的(见步骤4)。

9.在37℃下黑暗处温育板条1小时。

10.在温育后，用1x洗涤液在洗板机上洗板6次。

11.用多通道移液器每孔加入150μl EnWash。

12.不盖板，在室温下温育5分钟。

13.在温育后，用1x洗涤液在洗板机上洗涤6次。

14.用多通道移液器每孔加入75μlTMB底物液。

15.不盖板，在黑暗处温育10分钟。

16.经温育后，使用多通道移液器每孔加入50μl终止液。不盖版在室温下温育1分钟。

17.经温育后，使用酶标仪在450处读数。请确保酶标仪并没有扣除（本底）或者任何标准化的空白值或者孔。

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