多巴胺试剂盒

（德国IBL：货号：RE59161）

通用名称：多巴胺ELISA试剂盒
英文名称：dopamine ELISA
产品规格：96T
 

多巴胺试剂盒预期用途

多巴胺试剂盒可用于人血浆和尿液中多巴胺的体外定量检测，可手动操作，也可自动操作。进一步的研究表明：此试剂盒还可用于组织匀浆和细胞培养上清液的研究。

前言简介

儿茶酚胺类激素肾上xian素、去甲肾上xian素和多巴胺主要由肾上腺髓质、交感和大脑产生。它们几乎影响所有的组织，并与其它激素和一起参与各种生理过程的调节。在许多疾病中，儿茶酚胺激素及其代谢产物间甲肾上xian素和去甲变肾上xian素的分泌量都会增加，因而这些激素可的诊断。所以，这些激素的检测对于疾病的诊断及的具有重要意义。它主要用于嗜铬细胞瘤的诊断，当然也用于成神经细胞瘤和神经节细胞瘤的诊断。
因为在实验一开始时有提取步骤，所以用户可使用所有动物材料进行实验。此试剂盒可检测大鼠、小鼠或其它动物，所有动物的儿茶酚胺的化学结构相同。
 

多巴胺试剂盒检测原理

多巴胺试剂盒利用的是ELISA的夹心法。微孔中包被了羊抗兔抗体。在温育时间之内，加入的抗体可直接与抗原分子上的一个表位结合。样品中的抗原与酶标二抗（可与抗原分子上的不同表位结合）在包被孔中温育。加入底物液后，溶液所显示的颜色强度与样品中抗原的量成正比。样品的结果可直接用标准曲线确定。

贮存与稳定性

多巴胺试剂盒和运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封的试剂盒在有效期内稳定，前提是要将试剂盒用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。

实验所需器材（但试剂盒不提供）
1、移液器（10；10-100；100-1000μL）
2、轨道摇床（200-900rpm）
3、旋涡混合器
4、带储器的8通道移液器
5、洗涤瓶，自动或半自动包被板清洗系统
6、酶标仪，405nm(参考波长：620-650 nm)
7、双蒸水或去离子水
8、吸水纸，取样吸头，计时器
9、样品稀释用试管

多巴胺试剂盒检测步骤

1、在一次性试管内，用释放缓冲液以1:51的比例稀释提取的标准品，质控品和尿液样本（如：10ul提取样本+500ul的释放缓冲液）。
2、在包被板的每一微孔中加入75μL刚配置好的COMT酶溶液，轻轻振荡。
3、将预稀释的标准品，质控品和尿液样本加100ul至相应孔内血浆样本直接加100ul于相应孔内在此步骤中，将枪头直接触碰COMT酶溶液，颜色会转为粉红色，轻轻混匀。
4、每孔中加入50μL多巴胺抗血清。
5、盖板。在振荡器（400-600rpm）上18-25℃的环境下温育120min。
6、弃去孔内反应液，每孔用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板6次。
7、每孔加入100μL酶联物。
8、盖板。在轨道摇床（400-600rpm）上18-25℃的环境下温育60min。
9、弃去孔内反应液，用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板6次。
10、加底物液和终止液时，其时间间隔应相同。
11、每孔加入200μL底物液。
12、在轨道摇床（400-600rpm）上18-25℃的环境下温育40min。如果自动操作时的温度超过25℃时，则应相应的将温育时间缩短至30min。
13、每孔加入50μL PNPP终止液以终止底物反应，轻轻振荡包被板以充分混合试剂成分。
14、加终止液后60min之内405nm处读取OD值。（参考波长：620-650nm）
 

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