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| 产地 | 德国 |
| 保存条件 | |
| 品牌 | IBL |
| 货号 | RE56151 |
| 用途 | 科研 |
| 检测方法 | ELISA |
| CAS编号 | |
| 保质期 | |
| 适应物种 | |
| 检测限 | 定性/定量 |
| 数量 | |
| 英文名称 | |
| 包装规格 | 96T |
| 标记物 | |
| 纯度 | 参考说明书% |
| 样本 | 血清、血浆 |
| 应用 | 可用于人血清和血浆中百日咳杆菌IgM的定性和定量检测 |
| 是否进口 | 是 |
百 日 咳杆菌IgM检测试剂盒（酶联免疫法）
通用名称：百 日咳杆菌IgM检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：Bordetella pertussis IgM ELISA
产品规格：96T
产品货号：RE56151
产品品牌：德国IBL
百 日咳杆菌IgM检测试剂盒预期用途
百 日咳杆菌IgM检测试剂盒可用于人血清和血浆中百 日咳杆菌IgM的定性和定量检测。仅用于科研使用。
百 日咳杆菌简介
百 日咳是一种由百 日咳杆菌引起的呼 吸道疾病。它主要通过空气传播。这一革兰氏阴性球杆菌可产生一系列的生物学活性分子。典型的有百 日咳毒素（PT），丝状血凝素（FHA）和不同的脂多糖（LPS）。百 日咳有高传 染性，能产生严重的疾病，特别是对年纪非常小的儿童。
百 日咳疾病或百 日咳疫苗接种所形成的血清学反应可通过以下方法来测定：凝集检测、免疫沉淀、补体结合实验和酶联免疫吸附检测（ELISA）。在酶联免疫吸附检测中，百 日咳杆菌抗原（包括百 日咳毒素、丝状血凝素和脂多糖，标准为U/ml）可敏感的与固相结合，操作简便。通过检测IgM和IgA抗体，此ELISA试剂盒既可确定是否为血清学阳性，也可以显示出近期是否感染了百 日咳杆菌。
百 日咳杆菌IgM检测试剂盒检测原理
百 日咳杆菌IgM检测试剂盒利用的是夹心法。微孔内包被了抗原，用对人IgM有特异性的酶标抗体来检测样品中的特异性抗体（此抗体可结合到包被抗原上）。底物反应后，所显示的颜色的强度与检测到的IgM特异性抗体的量正比。样品的结果可直接用标准曲线获得。
百 日咳杆菌IgM检测试剂盒组成成分
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名称 |
数量 |
成分 |
| 标准品A~D | 4×2ml |
1；10；25；75U/mL，即用
标准品A=阴性质控 标准品B=临界质控 标准品C=弱阳性质控 标准品D=阳性质控 内含抗百 日咳杆菌IgM抗体，PBS（磷酸缓冲液），稳定剂。 |
| 酶联物 | 1×15ml | 红色、即用型。 |
| 微孔板 | 1×12×8 | 包被有特异性抗原。 |
| 底物液 | 1×15ml | 含TMB |
| 终止液 | 1×15ml | 0.5M的H2SO4 |
| 稀释液 | 1×60ml | 含PBS缓冲液，＜0.1%NaN3 |
| 洗涤液 | 1×60ml | 浓缩型（10×），含PBS缓冲液，吐温20 |
所需材料（未提供）
1) RF吸附剂（可以在IBL公司单独订购，货号REF KIRF561）
2) 移液器，体积：5；50；100；500 μL
3) 校准仪
4) 样品稀释用试管（1ml）
5) 带试剂储器8道移液器
6) 洗涤瓶，自动或半自动洗板机
7) 能在450nm处读数的酶标仪
8) 双蒸水或去离子水
9) 吸水纸，取样吸头和计时器
样品要求
血清，血浆（EDTA，肝素）
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按照一般原则进行静 脉采血。自样品采集到检测都应保持血液样品的化学完整性。不要使用易容血、黄 疸血和脂血样品。如果样品出现混浊，实验前应将其离心以除去颗粒物质。 |
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贮存 |
2-8℃ |
≤-20℃ |
避免高温和太阳直射，避免反复冻融 |
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稳定性 |
2天 |
＞2天 |
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检测方法
为了避免特异性IgG和类风 湿因子的干扰，患者血清应用RF吸收剂（REF KIRF561）进行处理。
成分准备
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稀释 |
加入 |
比例 |
备注 |
储存 |
稳定 |
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20ml 洗涤液 |
180ml 双蒸水 |
1：10 |
加热至37℃以溶解结晶，混匀 |
2-8℃ |
8周 |
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1ml RF吸附剂 |
20mL 稀释液 |
1：21 |
温育时间温育≥1min |
2-8℃ |
8周 |
样品稀释
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样品 |
稀释 |
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比例 |
备注 |
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血清/血浆 |
常规 |
稀释液（+RF吸附剂） |
1：101 |
例：5μL+500μL |
样品中百 日咳杆菌IgM的量如果比*标准品还高的应当用进一步稀释。
为了避免吸附特异性抗体，应当避免温育时间＞20min。
预处理的样品可能会是浑浊的。
百 日咳杆菌IgM检测试剂盒检测步骤
1、加100μL标准品和已稀释样本于相应反应孔中，在定性检测中只使用标准品B。
2、封板后室温（18℃-25℃）温育60分钟。
3、移去封板纸，弃去孔中液体。用300μL洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干。
4、在每一微孔中加入100μL酶联物。
5、封板后室温（18℃-25℃）温育30分钟。
6、移去封板纸，弃去孔中液体。用300μL洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干。加底物液和终止液时，如果有条件的话，可使用8孔微量移液器。确保底物液和终止液都是相同的时间间隔加入。使用确切容积并避免气泡产生。
7、每孔加TMB底物液100μL。
8、室温（18℃-25℃）避光温育20分钟，不盖封板纸。
9、在每一微孔中加入100μLTMB终止液以终止底物反应。轻轻摇动微孔板以使试剂混合均匀。此时，颜色蓝色变成黄色。
10、加终止液后60分钟内在450nm处测OD值。
结果计算
质量控制
严格按照实验步骤的实验结果才是有效的。使用者必须严格遵守实验室优化管理规定或其他的实验标准。按照质控单的要求，所有的标准品浓度都必须在一个可以接受的范围内。如果其标准不符合要求，那么实验则无效，必须重做。每个实验室应当使用已知浓度的样品做进一步的有效质控。如果实验背离实际结果，应检查以下问题：试剂有效期，贮存条件，取样器，实验设备，温育时间，清洗方法。
定性评估
临界值是直接从标准品B中得出。临界指标（COI）是由样本的平均OD值和临街质控的平均OD值计算得出来的。如果样本的平均OD值在临界值上下20%内，则该样本应判定为可疑样本；样本平均OD高于（临界值＋临界值×20%）则应判定为阳性；样本平均OD值低于（临界值－临界值×20%）则应判定为阴性COI=OD（sample）/OD(标准品B)
定量评估
以标准品的浓度值为X轴，吸光值为Y轴，在半对数做图纸或自动计算软件上绘制标准曲线，可采用3次回归，点对点做标准曲线，因为这些方法做标准曲线能够给出更准确的结果。对于标准曲线的计算，应用标准品的每个OD值（一个重复的明显的异常值可以省略，并且可以使用更合理的单值）。样品的浓度值可以直接在标准曲线上读取。当从图中读取结果时，已经考虑了初始稀释。较高预稀释样品的结果必须乘以相应的稀释因子。样本浓度高于*标准的样品必须如实验前准备说明章节所述稀释并重新检测。
科润达生物还提供百 日咳杆菌IgA试剂盒和百 日咳杆菌IgA试剂盒。
代理商：深圳市科润达生物工程有限公司
