登革.热IgG检测试剂盒原理及组成分析

检测试剂盒工作原理详细解读

• 固相化抗原： 微孔板的孔壁上已经包被了特定的登革病毒抗原。这些抗原就像“诱饵”一样，能特异性地捕获样本中存在的登革.热IgG抗体。
• 抗体结合： 当我们将含有待测血清的样本加入到微孔板中时，如果样本中存在登革.热IgG抗体，这些抗体就会与固相化的抗原结合形成抗原-抗体复合物。
• 酶联物结合： 随后加入酶联物，这是一种带有酶标记的抗人IgG抗体。这种酶联物能特异性地识别并结合已经与抗原结合的IgG抗体。
• 显色反应： 加入显色底物TMB后，酶会催化底物产生蓝色物质。这种颜色变化的深浅与样本中IgG抗体的浓度成正比，也就是说，颜色越深，说明样本中登革.热IgG抗体越多。
• 结果判定： 通过酶标仪测量450nm/620nm处的吸光度，并与已知的阳性、阴性对照比较，即可判断样本中是否存在登革.热IgG抗体。

试剂盒组成分析

• 微孔板： 反应的载体，孔壁上包被了登革病毒抗原。
• 样品稀释液： 用于稀释待测血清，保证反应的 条件。
• 终止液： 用于终止酶促反应，将蓝色反应产物转变为黄色，方便比色测量。
• 洗涤浓缩液： 用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，提高检测的特异性。
• 酶联物： 带有酶标记的抗人IgG抗体，用于检测结合在固相抗原上的IgG抗体。
• 底物液： TMB，在酶的作用下产生蓝色物质，用于显色。
• 阳性、临界、阴性质控： 用于校准仪器，评估检测系统的性能。

实验所需材料及设备

除了试剂盒提供的材料外，还需要以下设备：

• 酶标仪： 用于测量吸光度。
• 37℃培养箱： 用于孵育反应。
• 洗板机： 自动或手动洗涤微孔板。
• 移液器： 用于移取液体。
• 涡旋混合器： 用于混匀液体。
• 蒸馏水： 用于配制溶液。
• 一次性试管： 用于稀释样本。

注意事项

• 严格按照说明书操作： 每个试剂盒都有详细的操作说明，严格按照说明书上的步骤进行操作，可以避免实验误差。
• 温度控制： 试剂盒和样本应储存在2-8℃，实验过程中应注意温度控制。
• 时间控制： 严格控制每个步骤的反应时间，避免影响结果。
• 避免污染： 操作过程中应注意无菌操作，避免污染。
• 质控： 每次实验都应加入阳性、阴性对照，以评估实验的准确性。

实验流程简述

1. 样品预处理： 收集血清样本，按说明书要求进行稀释。
2. 加样： 将稀释后的样本加入到预包被的微孔板中。
3. 孵育： 在37℃孵育一定时间。
4. 洗板： 用洗涤液充分洗涤微孔板，去除未结合的物质。
5. 加酶联物： 加入酶联物，孵育。
6. 洗板： 重复洗涤步骤。
7. 加底物： 加入底物液，孵育。
8. 终止反应： 加入终止液。
9. 测定吸光度： 用酶标仪在450nm/620nm处测定吸光度。
10. 结果判定： 根据吸光度值和质控品的结果，判断样本是否为阳性。