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细菌培养物中OXA-48碳青霉烯酶检测试剂盒
【产品名称】
中文名称：细菌培养物中OXA-48碳青霉烯酶检测试剂盒
英文名称：OXA-48 K-SeT
【规格】
20T
【预期用途】
本试剂盒可用于体外快速检测细菌培养物中的OXA-48碳青霉烯酶。
【前言简介】
产碳青霉烯酶肠杆菌科（CPE）或耐碳青霉烯肠杆菌科（CRE）是世界范围内的一个主要公共卫生问题，因为它们具有广泛的耐药性，包括除碳青霉烯耐药外的大多数种类的抗菌药物，因此对感染患者的治疗管理的选择很少。CPE的迅速传播已经导致了欧洲和世界其他地方的一些国家的医院暴发和流行情况。碳青霉烯酶在非发酵革兰氏阴性杆菌（NFGNB），如铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中的出现和迅速传播，正在成为世界范围内的一场重大公共卫生危机。NFGNB不仅对内酰胺和其他抗生素有耐药性，对碳青霉烯类也有耐药性。D类OXA-48型碳青霉烯酶是临床实验室检测的最具挑战性的耐药性机制。基于抑制剂的表型验证试验用于A类（KPC）和B类（VIM，IMP，NDM）碳青霉烯酶的确认，但不用于D类碳青霉烯酶（OXA-48- like）的检测。其他表型比色法在某些情况下对检测低水平表达的碳青霉烯酶，如OXA-48不够敏感。如今，OXA-48的最终确认依赖于分子分析。这些测试费用昂贵，只能在专门的环境中由熟练的人员进行，因此限制了它们更广泛的使用。国际专家和卫生当局认为，开发新的快速诊断试验以跟踪抗菌素耐药性模式是优先的核心行动之一。
【检测原理】
本试剂盒是基于胶体金纳米颗粒膜技术的即用型检测试剂盒，用一种直接针对OXA-48碳青霉烯酶一个表位的单克隆抗体对硝酸纤维素膜致敏，另一种直接针对OXA-48碳青霉烯酶第二表位的单克隆抗体与胶体金纳米颗粒共轭，该共轭物在膜上干燥。本试验目的在于检测琼脂培养皿上生长的肠杆菌科或NFGNB单一菌落分离物中的OXA-48样碳青霉烯酶。当含有重悬细菌的缓冲液与膜接触时，溶解的共轭物通过被动扩散与样本迁移，共轭物和样本材料都接触到吸附在硝酸纤维素膜上的抗OXA-48抗体。若样本中含有OXA-48碳青霉烯酶，则共轭物-OXA-48复合物将继续与吸附在硝酸纤维素膜上的抗OXA-48抗体结合。15分钟内可根据检测卡上出现的红线读取结果。溶液继续迁移到达质控线与质控共轭物结合，生成第二条红线。
【试剂盒组成成分】
1）OXA-48检测卡： 20x，检测卡，单独包装
2）LY-A缓冲液： 15mL，含Tris、叠氮化钠（＜0.1%）和洗涤剂，pH7.5的盐溶液
3）带滴管的半刚性一次性收集管： 20x
4）使用说明书： 1x
【储存】
未开封的试剂盒应储存在4-30℃下，可储存至有效期；一旦打开检测卡包装袋，必须立即进行检测；避免冷冻检测卡缓冲液
【样品收集及处理】
待测标本应采用标准的微生物学方法来获得和处理。
确保样品没有用含有甲醛或其衍生物的溶液进行处理。
【准备工作】
检测前，将试剂盒所有组分和样本（含有待测菌落的培养皿储存在4℃下）平衡至室温（15-30℃），打开检测卡包装袋并取出检测卡，立即进行检测，需标记患者名字或样本编号（一个样本以个检测卡）
样品准备：
我们建议使用新鲜的菌落来获得最佳的测试性能。
1）准备一支半刚性收集管并加入10滴LY-A缓冲液
2）用一次性细菌接种环取1个菌落，并将细菌接种环浸入含有缓冲液的收集管底部，以收集细菌
3）在取出细菌接种环之前彻底搅拌混匀
4）插入滴管并涡旋均质化
5）缓慢滴加3滴稀释后的样本至检测卡样本孔中，或者用微量移液器吸取100μL加入样本孔中
6）等待反应15分钟后读取结果
当检测线和质控线可见时，可以更早地报告阳性结果。在超过反应时间后，不要考虑新线的出现。结果必须在仍然湿的检测卡上读取。
注：Positive（阳性）；Negative（阴性）；Invalid（无效）
阴性结果：检测卡阅读框中的质控线（C）出现一条红紫色的线，无其他线出现
阳性结果：质控线出现一条红紫色的线（C），检测区出现一条红紫色的线（T），检测线的强度可能根据抗原的数量以及样本中存在的OXA-48变异类型而变化。任何红紫色的检测线出现，即使是微弱的，也应被认为是阳性结果。
无效结果：没有质控线出现，表示试验失败，应使用新的检测卡重新检测
注意：在干燥过程中，在检测线的位置可能会出现一个非常微弱的阴影，它不应该被视为一个阳性的结果。
【性能】
检测限：用纯化的OXA-48重组蛋白测定的检测限为0.125 ng/ml
置信区间：95%
灵敏性：100%（96.4 - 100%）
特异性：100%（97.8 - 100%）
阳性预期值：100%（96.4 - 100%）
阴性预期值：100%（97.8 - 100%）
一致性：100%（173/173）
可重复性和可再现性
为了检验批次内的准确性（可重复性），相同的阳性样品和缓冲溶液在相同的实验条件下，在相同生产批次的试剂盒上处理15次。所有观察结果均与预期一致。
为了检验批次间的准确性（重现性），一些样品（阳性和缓冲液）对来自三个不同生产批次的试剂盒进行了处理。所有结果均符合预期的结果。
局限性
本试验是定性的，不能预测样品中抗原的数量；必须考虑临床表现和其他检测结果来确定诊断；阳性检测并不排除可能存在其他抗生素耐药性机制的可能性。
